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- 1. S0013 - 10%三氯化鐵溶液
- 2. S0001 - Kovacs氏靛基質試劑/柯凡克試劑 Kovacs Indole Regent
- 3. S0025 - 班氏試劑/Benedict氏定性試劑
- 4. S0005 - V-P試劑/VP試劑 Voges-Proskauer reagents
- 5. C0116 - 安瓿瓶試驗盒
山東拓普生物工程有限公司
Shandong Tuopu Biol-Engineering Co.,Ltd
腸桿菌科細菌生化鑒定套裝使用說明書
【產品名稱】T141 腸桿菌科細菌生化鑒定套裝15種(第二代15e)
【包裝規(guī)格】17支/套 1套/盒 10套/包（10盒）
【產品用途】用于腸桿菌科細菌生化鑒定（應滿足革蘭氏染色陰性，氧化酶陰性，葡萄糖發(fā)酵陽性）
【貯藏條件】2-8℃避光保存1年
【使用方法】1、從純化平板上挑取待檢菌落于生理鹽水中，制備成約0.5麥氏濁度的菌懸液；2、使用配套砂輪劃割安瓿瓶藍點正下方瓶頸處，背向藍點掰開安瓿瓶（戴手套操作），放入安瓿瓶試驗盒中；3、移液器移取100ul菌懸液加至安瓿瓶中（斜面生化管需沿斜面滴加菌懸液），葡萄糖酸鹽氧化實驗、半固體瓊脂、葡萄糖半固體發(fā)酵管請單獨按照注意事項接種操作；4、36±1℃培養(yǎng)，具體培養(yǎng)時間見下表，出現(xiàn)陽性結果后即可停止培養(yǎng)；5、判斷實驗結果，依照說明書中示例的計算方法將鑒定結果填入鑒定表中，計算得到鑒定編碼；6、查編碼冊，得到鑒定結果，如您無編碼冊，可將編碼告知我司代為查詢。
【重要聲明】使用本品時，并不是所有的編碼均有鑒定結果。這是因為有些生化反應模式不可能出現(xiàn)或目前尚未認識有這樣的菌種。在設計本編碼時，以刪繁就簡為原則，在項目的排列上以合理為最佳選擇。在使用時，如發(fā)現(xiàn)查不到鑒定結果，可重復鑒定一次或仔細分析生化實驗現(xiàn)象以確保判斷的生化反應結果無誤；如果實驗沒有問題，可結合16SRNA等鑒定方法進行綜合判斷。
【套裝組成及判斷方法】
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編號 |
產品名稱 |
培養(yǎng)時間 |
陽性結果 |
陰性結果 |
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第 1 組 |
T157 |
硫化氫試驗培養(yǎng)基(不含瓊脂) |
1-2天 |
黑色 |
不變黑 |
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T118 |
苯丙氨酸培養(yǎng)基 |
1-2天 |
綠色（見注意事項1） |
其它顏色 |
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T142 |
葡萄糖酸鹽氧化實驗 |
1-2天 |
見注意事項2 |
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第 2 組 |
T003 |
蛋白胨水（色氨酸肉湯） |
1-2天 |
紅色（見注意事項3） |
無紅色 |
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T001 |
緩沖葡萄糖蛋白胨水(MR-VP) |
1-2天 |
紅色（見注意事項4） |
無紅色 |
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T013 |
西蒙氏檸檬酸鹽瓊脂 |
1-4天 |
藍色 |
綠色 |
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第 3 組 |
T005 |
尿素瓊脂斜面 |
1-2天 |
深紅色或紫紅色 |
黃色或不變色(淺紅色) |
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T004 |
半固體瓊脂 |
1-2天 |
擴散生長（見注意事項5） |
不擴散生長 |
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T024 |
葡萄糖半固體發(fā)酵管 |
1-2天 |
黃色，產氣（見注意事項6） |
不產氣 |
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第 4 組 |
T008 |
賴氨酸脫羧酶肉湯 |
1-2天 |
對照管黃色-灰紫色 肉湯管紫色 （見注意事項7）
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對照管黃色，肉湯管黃色 或 對照管與肉湯管均為淺灰紫色
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T012 |
鳥氨酸脫羧酶肉湯 |
1-2天 |
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T009 |
氨基酸脫羧酶對照 |
1-2天 |
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T011 |
無菌液體石蠟 |
1-2天 |
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T015 |
棉子糖發(fā)酵管 |
1-2天 |
黃綠色-黃色 |
綠色或藍色 |
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第 5 組 |
T014 |
山梨醇發(fā)酵管 |
1-2天 |
黃綠色-黃色 |
綠色或藍色 |
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T121 |
側金盞花醇發(fā)酵管 |
1-2天 |
黃綠色-黃色 |
綠色或藍色 |
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T039 |
木糖發(fā)酵管 |
1-2天 |
黃綠色-黃色 |
綠色或藍色 |
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【所需配套產品】
S0013--10%三氯化鐵溶液；S0025--班氏試劑；S0001--Kovacs氏靛基質試劑； S0006--甲基紅試劑；
C0116--安瓿瓶試驗盒
【注意事項】
1、苯丙氨酸培養(yǎng)基：培養(yǎng)結束后，取出10%三氯化鐵溶液，輕輕搖勻，滴加2~3滴于培養(yǎng)結束的苯丙氨酸瓊脂斜面，使其沿斜面流下。
2、葡萄糖酸鹽氧化實驗: 接種大量新鮮待測純培養(yǎng)物（菌苔/菌落）于生化管中，培養(yǎng)后滴加班氏試劑（S0025）1ml，充分搖勻；使用鑷子等夾住試驗管于沸水中加熱10分鐘，靜置15-30分鐘后觀察結果；出現(xiàn)黃色-茶色-橙紅色沉淀為陽性，仍保持藍色或藍綠色為陰性。
3、 蛋白胨水（色氨酸肉湯）用于靛基質實驗，培養(yǎng)結束后滴加Kovacs氏靛基質試劑（S0001）2~4滴，立即觀察結果。出現(xiàn)紅色為陽性，無紅色為陰性。
4、緩沖葡萄糖蛋白胨水(MR-VP)用于甲基紅實驗：培養(yǎng)結束后，滴加2~3滴甲基紅試劑（S0006），輕輕震蕩，立即觀察結果，出現(xiàn)紅色為陽性，無紅色為陰性。
5、半固體瓊脂用于動力實驗：使用接種針挑取菌苔直立穿刺接種，需保證接種針在培養(yǎng)基內直線穿刺不發(fā)生左右偏移。培養(yǎng)結束后觀察穿刺線上細菌的生長情況，若細菌僅在穿刺線生長，則無動力；若細菌有沿穿刺線向四周擴散生長的現(xiàn)象，有動力。
6、葡萄糖半固體發(fā)酵管用于產氣實驗：使用接種針挑取菌苔直立穿刺接種。培養(yǎng)結束后觀察結果。如瓊脂內有氣體或發(fā)生破裂，則為陽性反應；沒有氣體為陰性反應。
7、賴氨酸脫羧酶肉湯、鳥氨酸脫羧酶肉湯和氨基酸脫羧酶對照三支生化管接菌后應立即覆蓋200-300ul的無菌液體石蠟，然后培養(yǎng)。按上表結合對照管一起觀察結果。本實驗有時較難判斷，建議于10h、20h、30h、40h左右多次觀察結果，結合對照管的顏色變化進行綜合判斷。
8、關于培養(yǎng)時間的說明：培養(yǎng)時間為1-2天，多數(shù)細菌繁殖較快，培養(yǎng)1天即可；如確實無法判斷細菌繁殖快慢，實際操作時可培養(yǎng)兩天，但是建議在培養(yǎng)10h、20h、30h、40h左右聯(lián)系觀察記錄實驗結果。對于糖醇發(fā)酵管而言，培養(yǎng)過程中如出現(xiàn)陽性反應，即使長時間培養(yǎng)后，黃色等顏色變回綠色，仍應判陽性反應。
9、本品附帶4頁鑒定表，每頁3張，共計12張，用于鑒定結果的記錄。
10、應急處置：使用時應佩戴手套，如不慎與身體直接接觸，應立即用水沖洗至少15分鐘。
11、本品僅用于微生物檢測，不用于體外診斷。
【編碼示例】
1、 將判斷得到的生化反應結果填入下表，陽性結果為“+”，陰性結果為“-”。
2、 單值指的是預先賦予該實驗項目的數(shù)值，只有當該實驗項目呈陽性反應時方可計入。
3、 將實驗分成了5組，分組計算各自陽性反應對應的單值之和得到總值。
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實 驗 項 目 |
第1組 |
第2組 |
第3組 |
第4組 |
第5組 |
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硫化氫 |
苯丙氨酸 |
葡萄糖酸鹽 |
靛基質 |
甲基紅 |
檸檬酸鹽 |
尿素 |
動力 |
葡萄糖產氣 |
賴氨酸 |
鳥氨酸 |
棉子糖 |
山梨醇 |
側金盞花醇 |
木糖 |
|
|
結果（+/-） |
- |
- |
+ |
+ |
- |
+ |
- |
- |
+ |
+ |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
|
單值 |
4 |
2 |
1 |
4 |
2 |
1 |
4 |
2 |
1 |
4 |
2 |
1 |
4 |
2 |
1 |
|
總值 |
1 |
5 |
1 |
5 |
7 |
||||||||||
|
鑒定碼為15157，查詢編碼冊得到鑒定結果為：產酸克雷伯氏菌 |
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